Спид определяется как тест
Тайна двух полосок. Как работают тесты на ВИЧ?
Даниил Давыдов
После выхода известного фильма Дудя большинство ВИЧ-сервисных НКО захлестнула волна желающих провериться. В том числе и СПИД.ЦЕНТР — поток клиентов увеличился почти втрое, а на тестирование пришли люди, раньше никогда не посещавшие открытого пространства фонда на Artplay.
Впрочем, и сам Дудь в помещении нашего фонда протестировался, эти кадры есть в фильме. Белой лопаточкой с пластиковой ручкой он проводит по деснам, затем предъявляет результат — одна полоска. «Здоров!»
Ввиду большого интереса публики, в том числе и клиентов, дошедших до нашего лофта на Нижней Сыромятнической, сегодня мы рассказываем, как устроены эти и другие тесты на ВИЧ. Почему на ручке тестера появляются полоски, насколько такое тестирование достоверно и надежно, а главное — какие альтернативы ему существуют.
Все, что вы хотели узнать о технологии тестирования на ВИЧ-инфекцию, — в одном материале.
Коротко о вирусе ВИЧ и ИФА
Все анализы на ВИЧ предназначены для того, чтобы либо разыскать части вируса, либо зафиксировать реакцию организма на его присутствие. Поэтому, чтобы понять, как работают тесты на ВИЧ, нужно примерно представлять, как устроен вирус и как он себя ведет, оказавшись в клетке.
Вирус ВИЧ — член семейства ретровирусов (Retroviridae). Представители этого семейства выглядят как крохотные круглые частицы, у которых есть оболочка, усеянная особыми белками. При помощи этих белков вирус распознает клетку-жертву и прикрепляется к ней.
Затем оболочки клетки и вируса сливаются, а внутрь клетки попадает содержимое вируса — нуклеокапсид. Нуклеокапсид — это белковая капсула, внутри которой находятся генетическая информация об устройстве вируса — две копии двухцепочечной РНК — и набор ферментов, которые «включают» РНК, когда та окажется в клетке. После слияния вируса с клеткой нуклеокапсид открывается, РНК и вирусные ферменты попадают внутрь, а сам вирус начинает свое черное дело.
Тестов на ВИЧ очень много, но их можно разделить на несколько больших типов. Те экспресс-тесты, которыми пользуются большинство ВИЧ-сервисных НКО, устроены по принципу иммуноферментного анализа, или ИФА.
Их задача — определить антитела к ВИЧ, которые организм вырабатывает в ответ на проникновение в него вируса.
Как это работает? Когда вирус ВИЧ попадает в организм, иммунная система человека не сидит без дела. Она начинает продуцировать антитела — иммунные белки, которые помогают организму бороться с инфекцией. Эти белки можно обнаружить во многих биологических жидкостях.
Способов обнаружения таких антител существует много. Но наиболее популярным считается именно иммуноферментный анализ (ИФА). За рубежом этот тест называется enzyme-linked immunosorbent assay, сокращенно — ELISA.
Почему две полоски?
Принцип ИФА основан на реакции «антиген-антитело». У человека берут кровь или жидкость с десен (это не совсем слюна), в которой могут находиться антитела к вирусу ВИЧ.
Затем к ней добавляют реактив с белками вируса ВИЧ, а вернее, антигенами, но не простыми, а «доработанными». Антиген, который используют в реакции, отличается от обычного вирусного белка тем, что к нему «прицепили» химическую метку.
Пока «меченые» антигены плавают в реактиве сами по себе, ничего не происходит. Но если в биологической жидкости есть антитела к ВИЧ, то они соединятся с «мечеными» антигенами и дадут сигнал, который может засечь лаборант или экспресс-тест. Если антител к ВИЧ нет — сигнала не будет.
В экспресс-тестах, которые используются фондом СПИД.ЦЕНТР и многими другими нашими коллегами для бесплатного и анонимного тестирования, антитела тонкой линией нанесены на специальную поверхность, спрятанную под пластмассовым корпусом тестера.
Сначала клиент промокает десневую жидкость лопаточкой, установленной на конце тестера. А как только жидкость собрана, лаборант опускает лопаточку в реагент, который в течение 15 минут поднимается по тестеру, достигая в итоге полоски с антигенами.
Если антитела в десневой жидкости, смешанной с реагентом, были — полоска краснеет.
Как правило, на ручке тестера имеется и вторая полоса — контрольная, она окрашивается в красный всегда. Так что, как правило, отрицательный результат (вируса в организме нет) маркируется одной полоской на рукоятке тестера, а положительный (вирус в организме есть) — двумя.
Две полоски на тестере — это верный признак того, что человек некоторое время назад получил ВИЧ-инфекцию. А стало быть, клиенту срочно нужно обратиться к врачу за терапией — в областной или городской центр СПИД. Там ему будут назначены подтверждающие анализы и прописана антиретровирусная терапия.
Точно такой же тест (ИФА), только лабораторный, можно сделать и во многих коммерческих клиниках — но за деньги. Технология его в целом выглядит так же, а точность отличается незначительно.
Какие бывают тесты ИФА?
● «Домашний» экспресс-тест — OraQuick HIV ½ Rapid Antibody Test. Материал для теста — жидкость, которую собирают с десен специальной мягкой щеточкой. Тест выдает результат очень быстро: в течение 20 минут.
● Лабораторный ИФА-тест — анализ на ВИЧ по форме 50. В нашей стране его применяют в качестве стандартной процедуры лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции. Материал для анализа — кровь из вены, которую нужно сдавать в лаборатории. Результаты приходят через 1—5 дней.
Что важно знать об ИФА-тестах?
У всех ИФА-тестов есть два серьезных недостатка. Во-первых, ИФА-тесты не определяют вирус ВИЧ сразу после инфицирования. Так происходит, потому что антитела к вирусу ВИЧ вырабатываются не сразу. Современные ИФА-тесты позволяют «засечь» иммунные белки только через 23—90 дней после заражения. Если сдать анализ до этого срока, можно попасть в «серологическое окно» — так называется время, в течение которого иммунная система еще не успела создать антитела к вирусным белкам, хотя вирус в организме уже есть.
Во-вторых, ИФА-тесты на ВИЧ иногда дают ложноположительные результаты — то есть «находят» вирус ВИЧ у людей, у которых его на самом деле нет. Лабораторный ИФА-тест на ВИЧ может ошибаться так же, как и экспресс. Именно поэтому все положительные ИФА-тесты, как правило, подлежат проверке при помощи более надежных методов. В нашей стране с этой целью применяют вестерн-блоттинг.
Подтверждающие тесты: вестерн-блоттинг (WB)
Цель этого теста — подтвердить результаты первичного анализа.
Вестерн-блоттинг можно провести только в лаборатории. Такие тесты не бывают «карманными», именно поэтому все НКО, которые тестируют граждан на ВИЧ, в итоге отправляют своих клиентов в лаборатории центров СПИД сдавать именно этот анализ, если экспресс-тестер показал положительный результат.
Вестерн-блоттинг (или иммуноблот) по технологии — тот же ИФА-анализ, основанный на реакции «антиген-антитело», только очень точный, долгий и кропотливый.
Чтобы провести анализ, у человека берут кровь и добывают из нее сыворотку. Это все та же кровь, только без эритроцитов, иммунных клеток и всего остального, что может образовывать сгустки крови. Потом эту сыворотку наносят на полоску из нитроцеллюлозы, на которой в строгом порядке размещены различные антигены ВИЧ — белки из оболочки и нуклеокапсида вируса. Если в сыворотке крови уже успели появиться антитела, они свяжутся с антигенами, размещенными на полоске.
Потом к смеси добавляют новый реактив-«проявитель». Как и в фотографии, этот реактив нужен, чтобы понять, прошла реакция или нет. В реактиве-«проявителе» находятся антитела, помеченные химической меткой. Но это антитела не к антигенам вируса ВИЧ, а к человеческим антителам, которые умеют связываться с комплексом «антиген-антитело».
Если в образце есть комплекс «антиген-антитело», на полоске проявятся окрашенные полосы. Каждая полоска означает свой вирусный белок. Реакция считается очень точной — в большинстве случаев вестерн-блоттинг позволяет исключить случайное срабатывание теста.
Какие бывают тесты этого типа? Разные. Некоторые позволяют подтвердить наличие вируса ВИЧ-1, некоторые — ВИЧ-2, а некоторые — обоих вариантов вируса сразу.
Пример: российская тест-система ИФА-Лайн-Блот-ВИЧ-1,2. Эта тест-система участвует в тендерах — закупках в государственные лаборатории, которые действуют при СПИД-центрах.
Что важно знать о вестерн-блоте?
В России вестерн-блоттинг считается золотым стандартом подтверждения ВИЧ-инфекции. Проблема заключается в следующем.
1. Вестерн-блоттинг все равно иногда дает неопределенный результат. В этой ситуации тест придется пересдать, причем только через три недели.
2. Вестерн-блоттинг дорогой и долгий. Тест требует сложного оборудования, кропотливой работы и квалифицированного персонала. А чтобы разобраться с результатами, нужна помощь эксперта.
В чем проблема с российскими анализами на ВИЧ?
В нашей стране для подтверждения ВИЧ-статуса используют лабораторный ИФА-тест и вестерн-блоттинг — это стандартная процедура. Однако Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) отмечает: в странах, где действует эта схема, на определение ВИЧ-статуса тратится очень много времени и средств. Причем ожидание результата настолько изматывает, что некоторые пациенты даже жалеют о решении узнать свой ВИЧ-статус.
Эксперты ВОЗ советуют отказаться от лабораторных ИФА-тестов и вестерн-блоттинга в пользу комбинированных экспресс-тестов, которые дают быстрый и более надежный результат. И это действительно работает.
Например, в США от «подтверждающего» инфекцию вестерн-блоттинга в принципе отказались. И для определения, и для подтверждения ВИЧ-статуса в этой стране используют комбинированные лабораторные и экспресс-тесты. Это не только дешевле для государства, но и психологически проще для людей: поскольку время ожидания меньше, а сама процедура — проще, все больше американцев вовремя узнают свой ВИЧ-статус и начинают своевременное лечение.
Комбинированные тесты
Цель комбинированных тестов, как и вестерн-блоттинга, — определить ВИЧ-статус человека.
Они представляют собой тот же анализ ИФА, но усовершенствованный — «два в одном». Тест позволяет определить не только человеческие антитела к вирусу ВИЧ, но и вирусный антиген — белок p24. Из этого белка состоит внутренняя оболочка вируса — нуклеокапсид, о котором мы говорили выше.
Комбинированные тесты на ВИЧ тоже бывают «домашними» и лабораторными.
● Пример «домашнего» комбинированного экспресс-теста — анализ Alere HIV Combo. Этот анализ можно сделать по крови из пальца (по сыворотке тоже, но годится и «простая» кровь), а результаты известны уже через 20 минут.
● Пример лабораторного комбинированного теста — HIV Ag/Ab Combo, который делают в частных лабораториях за деньги.
Что важно знать об этом тесте? Этот анализ относится к четвертому поколению. На сегодняшний день во всем мире именно он считается оптимальным способом выявления инфекции, потому что недорог и позволяет относительно рано узнать ВИЧ-статус клиента.
Если речь идет об определении ВИЧ-статуса, то в Европе и США чаще всего прибегают именно к комбинированным тестам. Если тест дает положительный результат, нет необходимости проводить подтверждающий анализ, его просто через некоторое время сдают повторно — и это считается достаточно надежным.
Дело в том, что антиген — вирусный белок р24 — появляется в крови уже в первую неделю после заражения, то есть задолго до того, как вырабатываются антитела. Поскольку комбинированный тест определяет антиген, шанс узнать свой статус есть уже через 21—28 дней после предполагаемого инфицирования.
После того как начинают вырабатываться антитела, вирусный белок р24 из крови пропадает. Иногда это происходит уже на вторую неделю, но у 90—95 % инфицированных людей антитела появляются в крови в первые три месяца после заражения.
Предсказать, когда именно появятся антитела, невозможно, ведь организм каждого человека по-своему реагирует на вирус ВИЧ. Но даже если антиген р24 из крови успеет исчезнуть, комбинированный тест найдет если не р24, то как минимум антитела, и все равно даст верный ответ.
ПЦР: самый сложный анализ
Тесты, позволяющие определить непосредственно генетический материал вируса ВИЧ, называются полимеразной цепной реакцией с обратной транскрипцией (ПЦР-ОТ).
Методов полимеразной цепной реакции (ПЦР), при помощи которой можно определять вирус ВИЧ, существует много. Но понять, что именно происходит в пробирке, проще всего на примере ПЦР с обратной транскрипцией (ПЦР-ОТ).
по теме
Общество
Две полоски. Как живут в Москве ЛГБТ-беженцы из Узбекистана
Этот тест позволяет обнаружить РНК вируса ВИЧ в крови. Если немного упростить, то реакция выглядит следующим образом. Сначала в сыворотку, содержащую РНК вируса, добавляют фермент, который «собирает» вирусную ДНК, используя РНК в качестве матрицы, — то есть проделывает почти то же самое, что и вирус, попавший в клетку.
Затем проводят стандартную ПЦР — реакцию, позволяющую увеличить концентрацию ДНК в образце до величин, которые уже можно без труда зафиксировать. Для этого к получившейся ДНК добавляют нуклеотиды — «кирпичики», из которых строится ДНК, — и фермент, который собирает из этих нуклеотидов вторую ДНК-цепочку. Чтобы фермент сработал, все это нагревают до определенной температуры и повторяют множество раз — до тех пор, пока не наберется достаточно ДНК. В таком виде тест можно использовать для определения ВИЧ-статуса человека.
Реакцию ПЦР-ОТ можно провести в режиме реального времени. Это помогает достаточно точно понять, сколько вирусных частиц находится в организме. Обычно для этого в реакционную смесь добавляют кусочек ДНК, помеченный химическим веществом, которое начинает светиться, когда кусок ДНК встраивается в молекулу. Так как этот кусочек ДНК подходит только к одному участку вирусной ДНК, можно подсчитать количество вспышек и понять, сколько же вирусной РНК первоначально было в образце.
Видео: как работает ПЦР-тест
Какие бывают тесты ПЦР? Полимеразная цепная реакция — это чисто лабораторный тест. Экспресс-тестов, основанных на ней, не бывает — ведь в момент, когда ДНК «достраивается», смесь нужно нагревать. А для того чтобы «прочитать» результат, требуется дорогостоящее оборудование.
ПЦР-ОТ — очень чувствительный тест, который способен определять даже очень небольшое количество вируса в крови. Причем достаточно рано: так как при анализе не нужно ждать появления в крови антител и вирусных белков, он «сработает» уже через несколько дней или недель после контакта с ВИЧ.
Но тест этот очень дорогой и сложный. Впрочем, это не единственная причина, по которой его не используют для определения ВИЧ-статуса для всех, хотя и это можно сделать в частной лаборатории за деньги. Дело в том, что тест подходит для определения только одного типа вируса — ВИЧ-1. ВИЧ-2 он не находит. Поэтому анализы ПЦР на ВИЧ обычно используют только для контроля лечения человека, который уже знает свой ВИЧ-статус.
Все о тесте на ВИЧ: когда делать и какой лучше?
Михаил Макматов-Рысь СПИД.ЦЕНТР
Чем отличается ИФА от ПЦР, и что эти аббревиатуры вообще значат? Через сколько тест точно покажет, есть у меня ВИЧ или нет? Где можно сдать? Ответы на эти и другие вопросы в разборе СПИД.ЦЕНТРа.
У каждого есть ВИЧ-статус, только у одних он положительный, а у других — отрицательный. Однако знать его необходимо, особенно в российских реалиях, когда в стране эпидемия, и уже более одного процента населения живет с вирусом.
Для диагностики вируса иммунодефицита человека существует несколько видов тестов, причем их классификация сложна лишь на первый взгляд, на самом деле она весьма логична. Главное — помнить, что, несмотря на высокую точность анализов, ни один тест не найдет вирус сразу после заражения.
Скрининговые (поисковые) тесты
Они помогают заподозрить инфекцию, но их результаты надо подтверждать другими анализами. Для скрининга используют тесты либо на антитела, либо на антигены/антитела.
ИФА (иммуноферментый анализ).
Этот метод служит не для обнаружения самого вируса, а антител, которые наша иммунная система вырабатывает для борьбы с ним.
Делают его следующим образом: на очищенные части вируса (антигены), зафиксированные в специальной лунке, наносят кровь. Если в ней есть антитела, то образуются иммунные комплексы антиген/антитело, которые вступают в реакцию с красителем, приводя к изменению цвета. Это оценивается качественно (есть/нет реакции) и/или количественно при помощи дополнительной аппаратуры.
Существует несколько поколений ИФА:
Современный ИФА позволяет обнаружить антитела, появляющиеся в крови с 30-го (цифры согласно клиническим рекомендациям Минздрава) дня инфицирования (по данным Центра контроля и профилактики заболеваний в США CDC — c 23 по 90 день).
по теме
Лечение
Как устроены ВИЧ и АРВТ? Объясняем на пальцах
За счет своей простоты и дешевизны этот метод используется чаще всего, в том числе на его основе работают экспресс-тесты.
Если такой тест оказался положительным, результат перепроверяется на тест-системе другого производителя, и в случае положительного результата применяется иммуноблот (смотри ниже).
Самое последнее поколение ИФА — четвертое. И оно уже позволяет проводить комбинированный анализ, одновременно проверяя: есть ли в крови белковые «обломки» ВИЧ (антигены), а также антитела.
Примечательно, что антиген р24 появляется в крови уже через 15 дней (по данным CDC — с 18 по 45 день) после инфицирования ВИЧ, поэтому такой вид анализа позволяет диагностировать ВИЧ-инфекцию раньше.
Так, эксперты из CDC считают комбинированные тесты наиболее предпочтительными для массового клинического использования. А российский Минздрав рекомендует его применять в качестве скринингового в большинстве лабораторий страны. Однако после получения положительного результата его также нужно перепроверять иммуноблоттингом.
Существуют два вида вируса ВИЧ — 1 и 2. В мире наиболее распространен ВИЧ-1. Разновидности вируса различаются по генетическому материалу, по-разному взаимодействуют с иммунитетом и отвечают на лечение.
Подтверждающие тесты
Как следует из названия, они позволяют наверняка убедиться в наличии или отсутствии вируса иммунодефицита у человека. Их минус в сложности и дороговизне.
Иммуноблоттинг помогает проверить результаты скрининговых анализов и уточнить, каким видом вируса инфицирован человек: ВИЧ-1, ВИЧ-2 или обоими. Этот метод обладает высокой точностью, чувствительностью, но дорог и сложен в исполнении. Он является комбинацией ИФА и электрофореза, что позволяет определить антитела к специфическим антигенам ВИЧ-1 (gp160, gp120, gp41). Белки под действием электрического поля располагаются в виде полосок на нитроцеллюлозной мембране.
При положительной реакции антиген/антитело на полосках становится видно потемнение.
ПЦР (полимеразная цепная реакция). Тест способен находить генетический материал ВИЧ (ДНК/РНК), то есть проверяет, есть ли непосредственно вирус в крови. Нуклеиновые кислоты могут обнаруживаться уже на 7-й день после инфицирования (по данным CDC — c 10 по 33 день).
При этом методе в пробирке с помощью различных ферментов многократно дублируется участок ДНК или РНК вируса до таких объемов, что его можно увидеть глазом в виде полосок. Кроме того, ПЦР бывает качественным и количественным. В последнем случае можно отслеживать вирусную нагрузку (концентрацию вируса в крови и других биологических жидкостях) у людей с ВИЧ, оценивая эффект терапии.
А я могу сдать сразу иммуноблот или ПЦР, чтобы узнать свой ВИЧ-статус?
Иммуноблот используют специальные лаборатории центров по борьбе со СПИДом. Пробы крови направляются туда для перепроверки уже положительных первичных скрининговых анализов. Сразу сдать его не получится, даже в платных клиниках.
ПЦР, наоборот, можно сдать в любой момент, но только обратившись в коммерческую лабораторию. В СПИД-центрах его делают также для перепроверки ранее положительного теста. Да, ПЦР позволяет максимально быстро (в течение 7—10 дней после инфицирования) обнаружить ВИЧ, но и у него есть недостатки:
Кроме того, прием PrEP и PEP могут влиять на точность анализов, так как антиретровирусные препараты уменьшают количество вируса в крови и антител к нему.
В случае с PEP после окончания курса рекомендуется посоветоваться с врачом и подобрать оптимальные сроки проведения анализов. Первый тест обычно проводят через 4—6 недель после контакта с ВИЧ, затем через 3 месяца, при необходимости — через 6 месяцев.
Считается, что крайне важно сдать анализ на ВИЧ перед началом приема PrEP и затем проверяться каждые 3 месяца, уже находясь на PrEP.
На результаты теста не влияют прием пищи и алкоголя или курение. Специальной подготовки перед сдачей анализов на ВИЧ не требуется.
А что с экспресс-тестами?
Они позволяют провериться на ВИЧ, не посещая лабораторию или поликлинику. По сути, это тесты ИФА третьего поколения, которые определяют антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 в слюне, моче или крови.
Их рекомендуют делать через три месяца после возможного риска инфицирования (чтобы избежать попадания в «окно»). Но считаются достоверными они с 30-го дня предполагаемого заражения (период появления антител).
На рисунке показано, как быстро в крови появляются сам вирус (его генетический материал РНК) антитела и антигены, а также какие системы тестирования можно применить.
Точность большинства экспресс-тестов при хронической (длительно текущей) ВИЧ-инфекции достаточно высока (> 99 % чувствительности и специфичности), но все равно чуть ниже лабораторных анализов.
Сегодня среди них наиболее популярны тесты слюны (или околодесневой жидкости) и крови. Их можно либо купить самому, либо получить бесплатно в ВИЧ-сервисных организациях.
Если вы сделали экспресс-тест и он оказался положительным, необходимо его перепроверить более точным методом.
Где я могу сделать тест на ВИЧ анонимно и бесплатно?
Можно пойти в местный СПИД-центр, кабинеты анонимного консультирования или в некоммерческие организации (например, фонд «СПИД.ЦЕНТР»). Анализ на ВИЧ бесплатный и анонимный, прикрепление к поликлинике и регистрация не требуются. После сдачи теста выдается идентификационный номер, по которому можно будет узнать результат.
КАКИЕ БЫВАЮТ ТЕСТЫ ВИЧ?
Для скрининга (т.е. быстрого и массового тестирования) применяется метод ИФА или ИХЛА. Для подтверждения диагноза применяется иммуноблот.
Для выявления ВИЧ в некоторых ситуациях применяется качественный (т.е. есть или нет, без ответа на вопрос «сколько?») ПЦР РНК или провирусной ДНК ВИЧ, но данный метод является на сегодня вспомогательным и его не следует использовать для скрининга ВИЧ-инфекции.
У лиц с диагностированной ВИЧ-инфекцией применяется количественный метод ПЦР на РНК ВИЧ, он позволяет ответить на вопрос сколько вируса в крови. Его так же не следует применять для диагностики.
КОГДА ПОСЛЕ РИСКА НУЖНО СДЕЛАТЬ ТЕСТ НА ВИЧ?
Оптимально сделать два теста: через 6 недель и через 12 недель (3 месяца, если округлить до целых месяцев) после риска — достоверность отрицательного результата будет предельно близка к 99,9 %. Тест через любой более длительный срок тоже будет достоверен.
На любых сроках от потенциально опасной ситуации после 6-12 недель ИФА не увеличивает и не теряет своей надежности, оставаясь точным методом диагностики и через год, и через два и далее. В очень редких случаях диагностические проблемы могут возникать у очень тяжелых, фактически терминальных пациентов, с развернутой картиной СПИДа. Подробнее можно почитать об этом здесь, также там даны ответы на вопросы о т.н. поздней сероконверсии.
ГДЕ Я МОГУ ПРОЙТИ ТЕСТ НА ВИЧ?
Существует много мест, где вы можете пройти тест на ВИЧ: в поликлинике, в кабинете частного врача, больницах, клиниках планирования семьи и в местах, специально отведенных для тестирования на ВИЧ.
Всегда старайтесь пройти тестирование там, где проводится консультирование. В некоторых местах имеются услуги по консультированию и тестированию на дому, которые могут включать консультирование пар и оказание им поддержки для безопасного раскрытия результатов после тестирования.
КАКОЙ НУЖНО СДЕЛАТЬ ТЕСТ?
ИФА или ИХЛА тест на ВИЧ. Это название технологии теста. Конкретное название оборудование будет написано на упаковке теста, например, Abbot ARCHITECT HIV Ag/Ab Combo.
ЗАЧЕМ ДЕЛАТЬ ТЕСТ ЧЕРЕЗ 6 НЕДЕЛЬ, ЕСЛИ ВСЁ РАВНО НУЖНО БУДЕТ ДЕЛАТЬ ЧЕРЕЗ 12? МОЖНО ОБОЙТИСЬ ТОЛЬКО ОДНИМ ТЕСТОМ ЧЕРЕЗ 12 НЕДЕЛЬ?
Да, можно. Первый тест даст уже очень высокую предварительную достоверность, что важно для диагностики, и, кроме того, при отрицательном результате позволяет легче переждать срок до финального теста через 3 месяца.
ЧТО ТАКОЕ ПЕРИОД (СЕРОНЕГАТИВНОГО) ОКНА?
Это период между заражением ВИЧ и появлением обнаруживаемых антител к вирусу.
В течение «периода окна» в крови ВИЧ-инфицированных людей нет антител, которые можно обнаружить с помощью теста на ВИЧ. Тест на ВИЧ отрицателен. Однако, в жидкостях организма человека, таких как кровь, семенная жидкость, влагалищное отделяемое и грудное молоко, уже может отмечаться высокий уровень ВИЧ.
ВИЧ может передаваться другим людям во время периода окна, даже если тест на ВИЧ не показал, что у вас ВИЧ-инфекция.
КАКОВА ДОСТОВЕРНОСТЬ ТЕСТА ЧЕРЕЗ 6 НЕДЕЛЬ ПОСЛЕ РИСКА?
Для тестов, определяющих и антитела и антигены — практически полная, для тестов только на антитела — примерно на уровне 95%.
ЕСЛИ ИФА ПОЛОЖИТЕЛЬНЫЙ, ТО ЭТО ОЗНАЧАЕТ ДИАГНОЗ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ?
Нет, требуется подтверждение другим методом. Подтверждающим методом для диагностики ВИЧ-инфекции сегодня является непрямая иммунофлюоресценция (РНИФ, иммуноблот, вестерн-блот). Иммуноблот демонстрирует высокую чувствительность (99,3 — 99,7 %) и специфичность (99,7 %), но так как метод определяет иммуноглобулины класса G, то с момента инфицирования результат может быть ложноотрицательным до трех недель.
У МЕНЯ ПЕРВЫЙ (ВТОРОЙ ТРЕТИЙ, СОРОК ШЕСТОЙ) ИФА ТЕСТ НА ВИЧ ПОЛОЖИТЕЛЬНЫЙ, А ИММУНОБЛОТ ОТРИЦАТЕЛЬНЫЙ. ЧТО ЭТО ЗНАЧИТ?
Это значит, что ВИЧ у Вас нет.
У МЕНЯ ИММУНОБЛОТ СОМНИТЕЛЬНЫЙ (НЕОПРЕДЕЛЕННЫЙ). ЧТО ЭТО ЗНАЧИТ?
Вам необходимо повторить иммуноблот через 2-3 месяца после первого. Если он будет отрицательным или останется неопределенным, то ВИЧ можно исключить. Иммуноблот может быть отрицательным или сомнительным сразу после инфицирования в пределах 4-8 недель, именно для этого его нужно повторить.
ПРОВЕРОЧНЫЙ ИММУНОБЛОТ ОКАЗАЛСЯ ПОЛОЖИТЕЛЬНЫМ. У МЕНЯ ВИЧ? ОШИБКИ БЫТЬ НЕ МОЖЕТ?
Да, у вас, к сожалению, ВИЧ. Не может.
У МЕНЯ ОТРИЦАТЕЛЬНЫЙ ТЕСТ ЧЕРЕЗ 3 МЕСЯЦА, НО У МЕНЯ ПРОДОЛЖАЮТСЯ НЕПОНЯТНЫЕ СИМПТОМЫ, У МЕНЯ ВИЧ?
ВИЧ у Вас нет. Ваши симптомы к ВИЧ отношения не имеют. С любой непонятной симптоматикой нужно обращаться к врачам очно.
ЕСТЬ ЛИ ВОЗМОЖНОСТЬ УЗНАТЬ О НАЛИЧИИ ИЛИ ОТСУТСТВИИ ВИЧ РАНЬШЕ?
Да, возможно. Первый ИФА (ИХЛА) Ат+Аг тест можно сделать уже через 3 недели после риска, его достоверность будет высокой. Если есть лишние деньги, то можно сделать тест ПЦР ДНК качественный на ВИЧ через 2 недели после риска, его результат тоже даст высокую предварительную достоверность.
Я СДАВАЛ ТЕСТ ЧЕРЕЗ 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12 МЕСЯЦЕВ ПОСЛЕ РИСКА. ОНИ ВСЕ ОТРИЦАТЕЛЬНЫЕ. НО Я ПЛОХО СЕБЯ ЧУВСТВУЮ, У МЕНЯ ЧЕШЕТСЯ ЛЕВАЯ ПЯТКА И ЗУДИТ ПОД ЛЕВОЙ ПОДМЫШКОЙ. У МЕНЯ ТОЧНО ВИЧ, Я УВЕРЕН, ПРОСТО ТЕСТЫ ЕГО НЕ ПОКАЗЫВАЮТ!
ВИЧ у Вас нет. Со СПИДофобией нужно обратится к психиатру очно.
В ЧЕМ РАЗНИЦА МЕЖДУ ИФА И ИХЛА? ЧТО ИНФОРМАТИВНЕЕ?
Иммуноферментный анализ (ИФА) и иммунохемилюминесцентный анализ (ИХЛА) это два способа забить гвоздь, большим красным, или средним зеленым молотком. Результат один и тот же — взаимодействие антигена с антителом или отсутствие такового. Т.е. информация — забитый гвоздь — в итоге одна и та же.
Обычно указания на ИХЛА в отношении диагностики ВИЧ носит характер артефакта, и на самом деле речь идет об ИФА. Т.е. с одной стороны — разницы нет, с другой — правильнее оперировать не названием метода, а названием тест-системы.
КАК УЗНАТЬ ПОКОЛЕНИЕ ТЕСТА, ОПРЕДЕЛЯЕТ ЛИ ОН АНТИГЕН?
Антиген определяется, если известно, что это тест 4-го поколения, если в названии теста фигурируют слова или буквы: антиген, antigen, аг, ag.
КАКИЕ ПОКОЛЕНИЯ ТЕСТОВ СЕЙЧАС ИСПОЛЬЗУЮТСЯ? МОГУТ ЛИ ЭТО БЫТЬ СТАРЫЕ ТЕСТЫ 2-ГО ПОКОЛЕНИЯ?
Все современные тесты — это тесты 3-го (без антигена) или 4-го (с антигеном). Более старые тест-системы не производятся и не используются уже как минимум лет пять. Все современные тесты дают полную достоверность через 12 недель после риска, независимо от их обозначений и поколений.
ЧТО ТАКОЕ ТЕСТЫ 4 ПОКОЛЕНИЯ? ЧЕМ ОТЛИЧАЕТСЯ РАЗНЫЕ ПОКОЛЕНИЯ ИФА?
Тесты 4 поколения детектируют ВИЧ-инфекцию раньше, так как «видят» не только антитела, как тесты 3 и более ранних поколений, но и антиген ВИЧ. Антитела вырабатываются организмом в ответ на ВИЧ-инфекцию, и на выработку нужно некоторое время. Антиген ВИЧ p24, это белок вирусного капсида, а именно непосредственно кусочек вируса. Понятно, что он начинает определяться в крови ранее, чем антитела — белки иммунной системы человека, которые вырабатываются в ответ на ВИЧ-инфекцию. Т.е. «период окна» для теста 4 поколения совсем небольшой. Когда начинают обнаруживаться в большом антитела против ВИЧ, антиген p24 часто уже не выявляется, вероятнее всего в результате образования комплекса между антигеном и антителами в крови. В случаях его обнаружения антиген p24 является высокоспецифическим индикатором инфекции.
КАКОГО ПОКОЛЕНИЯ БЫЛ МОЙ ТЕСТ?
Для Российской Федерации — четвертного, иных у нас не ввозится и не используется. В названии теста обычно присутствует что-либо из: «Combo», «At/Ag», «АТ/АГ» или «p24».
ВЫЯВЛЯЕТ ЛИ ИФА ТЕСТ 4 ПОКОЛЕНИЯ ВИЧ-2?
Да, все современные специализированные ИФА-системы выявляют ВИЧ-1 и ВИЧ-2.
КАКОЙ ПЕРИОД «ОКНА» ДЛЯ ТЕСТОВ 4 ПОКОЛЕНИЯ (AG/AT COMBO)?
Тест-системы 4 поколения способны обнаружить не только антитела к ВИЧ, которые организм вырабатывает в ответ на инфекцию, но и непосредственно ВИЧ, посредством выявления вирусного белка p24. Белок p24 может быть определен очень рано, но его уровень в крови в период после инфицирования постепенно снижается, но одновременно с этим снижением нарастает уровень антител. Все люди разные, потому назвать точный 100% минимальный срок, когда сомневаться в тесте уже нет поводов — невозможно. Однако, на сегодня есть достаточное количество исследований, которые дают нам весьма определенные ориентиры, приведем лишь несколько из них:
Итак, у нас достаточно данных считать, что лабораторные ИФА-системы 4 поколения с очень высокой вероятностью «не пропустят» ВИЧ-инфекцию уже через месяц поле инфицирования.
ТАК ВСЕ ЖЕ, С КАКОГО СРОКА ИФА 4 ПОКОЛЕНИЯ СОВЕРШЕННО НАДЕЖНО ИСКЛЮЧАЕТ ВИЧ?
Тест 4 поколения может в отдельных случаях выявлять ВИЧ-инфекцию уже через неделю после инфицирования, но ориентироваться на это все же нельзя, потому как это скорее исключение. Как Вы видели выше — месяц вполне надежный срок для современных лабораторных тест-систем.
Я ТЕСТИРОВАЛСЯ НА РАЗНЫХ СРОКАХ, В ТОМ ЧИСЛЕ И ЧЕРЕЗ 6-8 НЕДЕЛЬ, И ЧЕРЕЗ 12 НЕДЕЛЬ (3 МЕСЯЦА ПОСЛЕ ВОЗМОЖНОГО КОНТАКТА) И НЕ МОГУ УСПОКОИТЬСЯ, ПОТОМУ КАК НАБЛЮДАЮ РАЗЛИЧНЫЕ СИМПТОМЫ, В НЕКОТОРЫХ РЕЗУЛЬТАТАХ АНАЛИЗОВ ЕСТЬ ОТКЛОНЕНИЯ И Т.Д. И Т.П. ЧТО ДЕЛАТЬ? ЧТО МНЕ ЕЩЕ СДАТЬ?
Ничего, в данном случае вы имеете дело с неким иным заболеванием, и скорее всего с тревожным или тревожно-депрессивным расстройством. Получите консультацию квалифицированного инфекциониста, а затем, если инфекционная или иная природа будет исключена, то обратитесь за помощью к психотерапевту или психиатру.
ЧТО ТАКОЕ СПЕЦИФИЧНОСТЬ И ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ?
Специфичность диагностического теста – это доля верно определенных тестом заведомо отрицательных образцов.
Иначе говоря, для определения специфичности теста необходимо взять несколько тысяч заведомо здоровых людей и проверить их при помощи теста. Если на каждые 1000 образцов будет получено 10 ложных положительных результатов – то специфичность теста составит: (1000-10)/1000*100%=99%. Если количество ложных срабатываний больше, то специфичность становится меньше (т.е. хуже). Так, специфичность теста 99% означает примерно 10 ложных позитивных результатов на 1000 проверенных здоровых людей.
Внимательно изучите инструкцию и материалы предлагаемых на рынке тестов, найдите информацию о том, каким образом была проверена специфичность. Как правило, это данные по испытаниям нескольких тысяч образцов, полученных из разных географических регионов.
Чувствительность диагностического теста – это доля верно определенных тестом заведомо положительных образцов.
Иными словами, если мы возьмем 100 достоверно ВИЧ-инфицированных людей, проверим их тестом и получим 100 положительных результатов, то чувствительность теста будет равна 100%. Практически у всех тестов на рынке чувствительность 100%.
Нельзя путать понятия точности выявления положительных и отрицательных образцов. Точность выявления положительных образцов — это чувствительность теста, а точность выявления отрицательных образцов — это специфичность.
Чувствительный тест часто дает положительный результат при наличии заболевания (обнаруживает его). Однако, особенно информативен он, когда дает отрицательный результат, т.к. редко пропускает пациентов с заболеванием. Пример — ИФА.
Специфичный тест редко дает положительный результат при отсутствии заболевания. Особенно информативен при положительном результате, подтверждая (предположенный) диагноз. Пример — иммуноблот.
Логично использовать для скрининга (быстрого и дешевого тестирования большого числа пациентов) максимально чувствительный вид тестов, а вот для установления диагноза — максимально специфичные методы. Именно поэтому ИФА исторически является скрининговым, а иммуноблотом подтверждается ВИЧ-инфекция.
Важно понимать, что ложные положительные результаты существуют у всех тестов, никакой тест не может давать 100% специфичности! Результаты экспресс-тестов подлежат особой проверке и перепроверке в лабораторных условиях при помощи других методов. Результаты лабораторных ИФА тестов подлежат перепроверке методом иммуноблотинга.
МОЖЕТ ЛИ ТЕСТ БЫТЬ ЛОЖНОПОЛОЖИТЕЛЬНЫМ?
Да, может. В этом случае в обязательном порядке необходимо сделать проверочный тест иммуноблот, который точно покажет есть у человека ВИЧ или нет.
ПО КАКИМ ПРИЧИНАМ ТЕСТ НА ВИЧ МОЖЕТ БЫТЬ ЛОЖНОПОЛОЖИТЕЛЬНЫМ?
Причин много и все они не известны. Самая частая причина — беременность, также такую вероятность несколько увеличивает недавние вакцинирование некоторыми иммунопрепаратами.
МОЖЕТ ЛИ ТЕСТ БЫТЬ ЛОЖНООТРИЦАТЕЛЬНЫМ?
Может, если он сделан в период окна, который длится до 3-х месяцев после риска инфицирования.
КАКОВЫ ПРИЧИНЫ ЛОЖНООТРИЦАТЕЛЬНОГО РЕЗУЛЬТАТА В ТЕСТЕ НА ВИЧ?
Ложноотрицательный результат, а точнее существенное удлинение «периода окна», может вызвать начатая очень рано после инфицирования антиретровирусная терапия или постконтактная профилактика, прием средств, подавляющих иммунитет (иммунодепрессантов, например, после пересадки органов и др.), а также некоторые тяжелые заболевания иммунной системы.
Но, нужно понимать, что тесты 4-го поколения определяют не только антитела, но и антиген p24, который является белком вирусной оболочки, т.е. эти тесты определят ВИЧ-инфекцию, даже если антитела по каким-то причинам задерживаются.
Алкоголь, иные психоактивные вещества, любая пища, БАДы, иммуностимуляторы, иммуномодуляторы, антибиотики и любые иные препараты, стресс, полнолуние, созерцание белого коня, усталость, общая болезненность и ослабленный иммунитет, грипп, ангина и прочие заболевания — все это не оказывает значимого влияния на риски ложноотрицательного результата теста на ВИЧ.
Чувствительность тестов на ВИЧ исследована и подтверждена в реальных условиях и на больших выборках, где люди принимают алкоголь, нервничают, принимают самые разные препараты, болеют различными заболеваниями, имеют самые разные отклонения лабораторных параметров.
Я СДАВАЛ ОБЩИЙ АНАЛИЗ КРОВИ (БИОХИМИЮ ПЕЧЕНИ, ИММУНОГРАММУ, ЛИПИДНЫЙ ПРОФИЛЬ), АНАЛИЗЫ В НОРМЕ. ОЗНАЧАЕТ ЛИ ЭТО, ЧТО У МЕНЯ НЕТ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ?
Нет, не означает. Ни по каким анализам, кроме теста на ВИЧ, невозможно ни исключить ни подтвердить ВИЧ-инфекцию.
Я ПРИНИМАЮ АНТИБИОТИКИ (АНТИДЕПРЕССАНТЫ, ТРАНКВИЛИЗАТОРЫ, НАСТОЙ НА МЫШИНЫХ ХВОСТАХ), БУДЕТ ЛИ ТЕСТ ДОСТОВЕРЕН?
Будет. Никакие препараты, кроме препаратов АРТ в качестве постконтактной профилактики не влияют на достоверность теста на ВИЧ.
Я ПЕРЕД СДАЧЕЙ ТЕСТА ВЫПИЛА СТАКАН ПИВА (БУТЫЛКУ ВОДКИ, СЪЕЛА ДВА ТОРТА, ВЫКУРИЛА 5 ПАЧЕК СИГАРЕТ, КОСЯЧОК МАРИХУАНЫ), НЕ ПОВЛИЯЕТ ЛИ ЭТО НА РЕЗУЛЬТАТ ТЕСТА?
МОЖЕТ БЫТЬ ТАК, ЧТО АНТИГЕН УЖЕ СВЯЗАН АНТИТЕЛАМИ, А АНТИТЕЛ ЕЩЕ МАЛО ДЛЯ ТЕСТА?
Этот феномен описан, но это весьма короткоживущий феномен, по сути это точка пересечения двух условных кривых, никто вам не скажет, это часы или десятки минут, но точно не многие дни, скорее следует предполагать как максимум (предположение, для утверждения не достаточно данных) 1-2 суток. И в любом случае этот феномен, если и возникает, то находится там, где мы вообще из осторожности не говорим о полной достоверности тестирования, т.е. внутри первых 4-6 недель, и с очень высокой долей вероятности этот период внутри еще более короткого промежутка — в пределах первых двух недель, т.е. мы как бы укладываем оба окна одно в другое. Плюс, по всей видимости, есть некоторые условия, которые хоть сколько то значимыми делают вероятность «подловить» это самое второе окно — исходные иммунодефицитные состояния, например, связанные с возрастом.
Если бы доминирующие ИФА системы отдельно показывали срабатывание At или Ag линии, то мы бы знали (т.е. мы и так это знаем, но вот имели бы статистику по этому поводу), что за редким исключением выявление ВИЧ происходит по At линии, а если бы мы неким волшебным образом знали дату инфицирования, то мы бы знали, что за редким исключением мы выявляем довольно поздно, спустя многие месяцы и годы. В отдельных группах риска под влияем активных действий ситуация может чуть смещаться в сторону более раннего выявления, но это все не меняет погоды по большому счету. Т.е. реальных практических рисков феномен второго окна не несет — любой врач будет рекомендовать и принимать во внимание тестирование на тех сроках, когда с очень высокой вероятностью будет антитела в достаточных для детекции количествах.
А КАКИЕ ПОДТИПЫ ВЫЯВЛЯЕТ ИФА? ЧТО ЕСЛИ Я ЗАРАЗИЛСЯ РЕДКИМ ПОДТИПОМ И ТЕСТ ЕГО НЕ ВИДИТ?
Нет, такого не бывает. Современные скрининговые ИФА-системы выявят любой подтип из группы M и O. Представителей групп N и P зарегистрировано единичное число, их очень непросто найти даже в Камеруне, где их число чуть больше ноля, и измеряется единицами. Как только, с точки зрения эпидпроцесса, распространенность группы превысит хотя бы сотые доли процента, и будут обнаружены в за пределами африканской глуши хотя бы единичные пациенты, то и тест-системы официально подтянутся, вслед за нуждами — будут проведены широкие исследования и появятся группы и подтипы в технических характеристиках систем, то, что их нет там сегодня означает лишь то, что их нет официально. На данный момент рассматривать подобные сценарии нет смысла.
В 2006 ГОДУ ИХ БЫЛО ИЗВЕСТНО ДЕСЯТЬ КАМЕРУНЦЕВ С ГРУППОЙ N, НО СПУСТЯ 5 ЛЕТ, ПОСЛЕ ТЩАТЕЛЬНЫХ ПРОСЕИВАНИЙ ТЫСЯЧ КАМЕРУНЦЕВ НАШЛИ ЕЩЕ… ЧЕТЫРЕ.
По разным оценкам от 400 до 800 тысяч камерунцев живут с ВИЧ, и мы знаем, что возможно до 0,1% являются носителями группы N. Т.е. от 400 до 800 человек на планете.
Важно: все редкие группы и подтипы ВИЧ были выявлены исходно обычным методом ИФА. То, что в технических характеристиках систем не указаны эти подтипы, говорит лишь об одно — число пациентов слишком мало, чтобы можно было бы провести стандартные исследования, для которых требуется не несколько случаев, а сотни, и официально утвердить у регулятора новые строчки в инструкции.
Я СЛЫШАЛА, ЧТО МЕТОДОМ ИФА ВИЧ-2 ВЫЯВЛЯЕТСЯ ПОЗДНЕЕ, ЭТО ТАК?
В данном случае это не имеет значения, антитела выходит на уровень достаточный для детекции примерно в одни и те же временные рамках, общие перестраховочные сроки 6-8 недель от опасного контакта «накрывают» и ситуации с ВИЧ-1 и с ВИЧ-2.
АПТЕЧНЫЕ ИФА ЭКСПРЕСС-ТЕСТЫ ДОСТАТОЧНО НАДЕЖНЫ?
Экспресс-тесты на антитела к ВИЧ в США одобрены с 2002 года, в том числе ультрабыстрые тесты, чувствительность таких тестов от 93% и специфичность — от 99%. Одобренный и доступный в РФ экспресс-тест Alere Determine HIV ½ Ag/Ab Combo, значительно уступает по способности к обнаружению антигена р24 ВИЧ по сравнению с коммерческими лабораторными системами 4 поколения.
Следует учитывать, что экспресс-тесты значительно чаще лабораторных дают ложный положительный результат. Положительный прогностический результат для РФ у экспресс-тестов будет примерно 50 на 50, т.е. если экспресс-тест дает положительный результат, то в среднем, т.е. для групп низкого риска, вероятность в данном случае наличия ВИЧ-инфекции лишь 50%, и любой положительный результат обязательно требует перепроверки методом ИФА в условиях лаборатории.
МОЖНО ЛИ ПРИМЕНЯТЬ ПЦР РНК ИЛИ ДНК ВИЧ ДЛЯ СКРИНИНГА НА ВИЧ?
Да, можно. но не не рекомендуется. Хотя за последнее десятилетие метод стал значительно дешевле и точнее, но все же он до сих пор и дорог, более длительный, и технически сложен, что предполагает большие риски ошибок. В России, так же впрочем, как и США, количественный метод ПЦР не рекомендован для скрининга и диагностики ВИЧ-инфекции в обычных случаях.
ЧЕМ ОТЛИЧАЕТСЯ ПЦР ДНК ОТ ПЦР РНК ВИЧ?
РНК обычно используется в количественных тестах для оценки вирусной нагрузки у диагностированных лиц, например для оценки эффективности терапии. ДНК — в мононуклеарных клетках, например для диагностики у детей, там, где антитела к ВИЧ матерей мешает использовать метод ИФА. И тот и другой тест могут быть и количественными и качественными. И тот и другой можно в узких случаях применить как диагностический, с учетом конкретных ограничений, которые накладывают технические параметры системы.