Антиген а2 имеет гораздо более высокую агглютинабельность чем антиген а1

09.09.202310.09.2023 admin 0 Comments

Антиген а2 имеет гораздо более высокую агглютинабельность чем антиген а1

Важную роль в индукции и регуляции иммунного ответа играют мононуклеарные фагоциты. Участие макрофагов в иммунных реакциях включает неспецифическое поглощение Аг, их «переработку» (то есть расщепление на меньшие фрагменты) и представление Аг Т-лимфоцитам, образование ИЛ-1, а также других цитокинов (см. табл. 10-7). Помимо макрофагов, представлять Аг способны В-лимфоциты, фолликулярные клетки лимфатических узлов и селезёнки, клетки Лангерханса кожи и воздухоносных путей, М-клетки лимфатических фолликулов пищеварительного тракта, дендритные эпителиальные клетки вилочковой железы. Наряду с нейтрофилами и эозинофилами, макрофаги участвуют в антителозависимом клеточно-опосредованном цитолизе (имеют поверхностный рецептор к Fc-фрагменту IgG, представляющий CD 16).

Иммунные реакции. Классификация имунных реакций

Большинство иммунных реакций требует взаимодействия Аг-распознающих, Аг-представляющих, эффекторных и регуляторных клеток. Иммунные реакции традиционно разделяют на гуморальные (реализуются циркулирующими в средах организма AT) и клеточные (реализуются при непосредственном контакте иммунокомпетентных клеток). Вместе с тем все иммунокомпетен-тные клетки — компоненты единой иммунной системы. Поэтому такое разделение носит условный характер, тем более, что AT синтезируются клетками (плазмоцитами), а Т-лимфоциты проявляют свою активность через различные растворимые факторы (цитокины и хемокины).

Антигены. Свойства антигенов. Структура антигенов ( Аг )

Антигены — вещества различного происхождения, несущие признаки генетической чужеродное™ и вызывающие развитие иммунных реакций (гуморальных, клеточных, состояние иммунной толерантности, индуцирование иммунной памяти). Свойства Аг определяются комплексом признаков: иммуногенность, антигенность, специфичность, чужеродность.

• Иммуногенность — способность индуцировать иммунный ответ.
• Антигенность — способность Аг избирательно реагировать со специфичными к нему AT или Аг-распознающими рецепторами лимфоцитов. С понятием «антигенность» связан другой термин «чужеродность»: без чужеродности нет антигенности применительно к конкретному организму. Например, альбумины мыши не проявляют антигенные свойства по отношению к другим мышам, но являются Аг для морской свинки.
• Специфичность — структурные особенности, отличающие один Аг от другого.

Способностью вызывать развитие иммунного ответа и определять его специфичность обладает фрагмент молекулы Аг — антигенная детерминанта (эпитоп), избирательно реагирующая с Аг-распознающими рецепторами и AT. Антигенные детерминанты располагаются в областях Аг, обращенных к его микроокружению.

Эпитоп — наименьшая распознаваемая единица Аг; молекула Аг может иметь несколько эпитопов, то есть быть поливалентной. Чем сложнее молекула Аг и чем больше у неё эпитопов, тем больше вероятность развития иммунного ответа. Структура многих антигенных детерминант известна. Например, в полипептидной последовательности эпитопом может быть фрагмент из 7-8 аминокислотных остатков; свойства антигенности и специфичности определяются также пространственной конфигурацией фрагмента.

Моноклональные AT специфически распознают только одну Аг-детерминанту и связываются с ней. Поликлональные AT, как правило, распознают несколько антигенных детерминант в составе Аг.

Валентность Аг

Белки содержат несколько Аг-детерминант. Количество молекул AT, связывающих все эпитопы, определяет валентность Аг (возрастает пропорционально увеличению молекулярной массы белковой молекулы).

Источник

Вакцины, антитела, антигены. Гид по иммунологии для чайников

Андрей Смирнов

Антитела, антигены, титры, тесты, вакцины — сейчас все это буквально из каждого утюга. «СПИД.ЦЕНТР» объясняет, какими бывают антитела, откуда они берутся и как все это связано с вакцинами и иммунитетом.

Что такое антитела?

Антитела (они же иммуноглобулины) — это специальные белки, которые вырабатывают клетки нашей иммунной системы для борьбы с «чужеродным вторжением» — проникновением в организм практически чего угодно, что наша иммунная система посчитает потенциально опасным. Это могут быть бактерии, вирусы, их токсины — так наш организм защищается от инфекции, или даже безобидная пыльца растений и лекарства — и в этом случае развивается аллергия.

Вещество, в ответ на которое начали вырабатываться антитела, называют антигеном. И да, антиген — это именно вещество, так как антитела вырабатываются не против вируса или бактерии «целиком», а против тех или иных конкретных вирусных или бактериальных белков. Например, если говорят об антителах против вируса гриппа, подразумевают антитела против двух белков из оболочки этого вируса — гемагглютинина и нейраминидазы. В случае SARS-CoV-2 речь чаще всего идет о шиповидном белке оболочки вируса (он же S-белок или спайк-белок).

Антитела обладают высокой специфичностью, то есть работают строго против определенного антигена или небольшой группы антигенов, очень сходных по своей структуре. Суть работы антител довольно простая — они химически связываются с антигеном и блокируют его взаимодействие с другими молекулами. Например, антитела против шиповидного белка оболочки коронавируса будут «прилипать» к этому белку, обволакивая вирусную частицу, — и такой вирус уже не сможет «прилипнуть» к клетке и проникнуть в нее. Кроме того, частицы с «налипшими» на них антителами гораздо «аппетитнее» выглядят для клеток нашей иммунной системы и будут быстрее поглощаться и перевариваться макрофагами — этот эффект называется «опсонизация».

Как организм понимает, какие антитела вырабатывать?

Выработка антител — довольно сложный и многостадийный процесс. Если очень коротко, то специальные клетки иммунной системы поглощают и переваривают потенциально опасную частицу (например, бактерию или вирус), буквально разбирают ее на кусочки. И затем показывают эти кусочки другим клеткам, которые подбирают подходящую структуру антитела так, чтобы это антитело могло химически связаться с одним из «кусочков» переваренной бактерии. Когда нужная структура найдена — запускается массовое производство антител. На этот процесс требуется немало времени, поэтому после первого контакта с антигеном накопление антител начинается примерно через 2 недели. Выработанные антитела циркулируют в крови около 4 недель, после чего разрушаются, при этом выработка новых антител может продолжаться.

Хорошая новость в том, что иммунная система умеет «запоминать» антигены, и при следующем контакте организму уже не нужно тратить 2 недели на поиск нужной структуры антитела — выработка начинается практически сразу. Именно так работает приобретенный иммунитет.

Иммунологическая память хранится разное время. Для некоторых инфекций, например для клещевого энцефалита, это 3–5 лет. Для других, например гепатита B или кори, — от десятков лет до пожизненной «гарантии». Именно от времени хранения иммунологической памяти, а не от текущей концентрации антител в крови зависит стойкость иммунитета и риск повторной инфекции.

Как антитела вырабатываются при вакцинации?

Для начала синтеза антител организму не обязательно сталкиваться с живой опасной бактерией или вирусом. Достаточно будет «убитого» или ослабленного микроба, кусочка его оболочки или даже отдельного белка — это тоже запустит иммунную реакцию и выработку антител. Эти антитела будут совершенно нормально работать и против живого опасного возбудителя инфекции. В этом и заключается смысл вакцинации — знакомим иммунную систему с ослабленным или убитым микробом, чтобы она научилась убивать живых и опасных.

Продолжительность вакцинного иммунитета тоже зависит от иммунологической памяти и может отличаться от естественного иммунитета, возникшего после болезни. Когда иммунитет угасает, нужно вакцинироваться снова. Для вакцин от разных инфекций есть свои графики повторной вакцинации, их частота зависит от времени хранения иммунологической памяти.

Вакцины, полученные по различной технологии, могут отличаться по времени действия вакцинного иммунитета. Обычно эти различия не слишком велики, так как продолжительность иммунитета в гораздо большей степени зависит от вида самого возбудителя, чем от конкретной вакцины.

На формирование защитного иммунитета также влияет состояние самого организма. Например, при тяжелых заболеваниях иммунной системы (наследственные иммунодефициты, злокачественные новообразования) иммунный ответ на вакцину может быть снижен или не формироваться вообще. Как показывает многолетний опыт использования разных вакцин, в случае ВИЧ-инфекции иммунный ответ на вакцины, как правило, ничем не отличается от иммунного ответа у ВИЧ-негативных людей. Поэтому графики вакцинации и дозы вакцины для ВИЧ-позитивных пациентов не будут иметь никаких особенностей.

по теме

Лечение

Безумно дорогое лекарство, которое спасет мир от пандемии

Некоторые лекарства, например глюкокортикоиды и иммунодепрессанты, могут подавлять формирование вакцинного иммунитета. В таких случаях тактику вакцинации нужно обсудить с врачом.

Для вакцин от новой коронавирусной инфекции время действия вакцинного иммунитета остается одним из главных вопросов. Предсказать продолжительность защиты той или иной вакцины очень трудно. Обычно это выясняют на практике, регистрируя частоту инфекций у привитых во время массовой вакцинации людей спустя разное количество времени, а также измеряя титр защитных антител.

Титр? Какой еще титр?

Как мы уже выяснили, антитела — это белки, которые циркулируют в крови. Для того чтобы обеспечивать эффективную защиту, эти белки должны быть в крови в определенной концентрации — ее и называют титром. Выражают титр в виде чисел, разделенных двоеточием, например 1:50 или 1:100 (читается как «один к пятидесяти» или «один к ста»).

Так как антитела — это сложные белки, определять их химическими методами крайне трудно. Поэтому для определения антител используют иммунологические реакции. Конкретных методов очень много, но в самом общем виде суть этих реакций очень простая. Мы берем раствор нужного антигена (например, того самого шиповидного белка коронавируса) и смешиваем его с сывороткой, в которой ищем антитела. Если антитела в сыворотке есть, то они связываются с антигеном и их соединение выпадает в виде осадка или раствор мутнеет. На практике проведение такой реакции выглядит сложнее, часто используют специальные гелевые среды и разные способы детектирования, но суть от этого не меняется.

Проблема в том, что такой подход отвечает нам только на вопрос, есть антитела в сыворотке или их нет, но ничего не говорит о количестве самих антител. Как в таком случае сравнить между собой две разные сыворотки? По количеству выпавшего осадка — не вариант, слишком большая погрешность. Но есть другой способ — можно разводить исследуемую сыворотку до тех пор, пока реакция (осадок) все еще будет обнаруживаться. И вот последнее, самое сильное разведение, при котором мы еще можем наблюдать реакцию сыворотки с раствором антигена, и называют титром этой сыворотки. То есть титр 1:50 говорит нам о том, что эту сыворотку можно развести в 50 раз и она еще будет давать реакцию с антигеном. Соответственно, чем больше вторая цифра в обозначении титра, тем выше концентрация антител в сыворотке.

Недостаток титра в том, что он указывает на относительное содержание антител. Если у нас есть две сыворотки с титрами 1:50 и 1:100, мы можем с уверенностью сказать, что во второй сыворотке антител в 2 раза больше, чем в первой. Но какая именно концентрация антител в каждой из этих сывороток, мы не знаем. На практике это часто бывает и не нужно: нам достаточно знать, с каким титром антител человек еще защищен от инфекции, а с каким — уже нет. Это легко выяснить, измеряя титр антител у вакцинированных людей, которые все же заразились.

В результатах лабораторных анализов обычно указывают концентрацию антител в международных единицах (МЕ) или относительных единицах (ОЕ). Результаты, полученные в МЕ, можно сравнивать между собой — значение не будет зависеть от лаборатории, тест-системы и условий анализа (для коронавируса таких пока нет). Результаты, выраженные в ОЕ, можно сравнивать между собой только для тестов одной марки, при этом сама лаборатория и время анализа роли не играют, то есть можно отслеживать динамику изменения уровня антител у одного человека.

Чтобы понять, нужна ли вакцина и подействовала ли она, достаточно измерить уровень антител? Какой нужен для ковида?

К сожалению, все немного сложнее. Антитела отвечают за гуморальный иммунитет — и это только лишь часть нашей иммунной системы. Помимо гуморального, есть еще клеточный иммунитет, работа которого не зависит от уровня антител. При защите от разных инфекций разные звенья иммунитета играют неодинаковые роли. В каких-то случаях ведущую роль имеет гуморальный иммунитет и антитела (например, в случае гепатита В, гриппа, столбняка и многих других инфекций). В других случаях — ведущая роль у клеточного иммунитета, например, при туберкулезе. По новой коронавирусной инфекции пока слишком мало данных, чтобы делать выводы о важности каждого из звеньев иммунитета и необходимом уровне антител. То есть даже если вы сделаете тест на антитела, эта информация практически ничего не даст по ряду причин.

Если вы еще не вакцинировались и тест на антитела будет положительным, что говорит о перенесенной инфекции в бессимптомной форме, это все равно не является противопоказанием к вакцинации. Мы не знаем, какова продолжительность естественного иммунитета, так что вакцина может продлить или усилить защиту.

Если вы делаете тест на антитела после вакцинации, сейчас нет надежных данных, с которыми можно было бы соотнести полученные результаты и сделать вывод о том, подействовала ли вакцина. Другими словами, пока никто не знает, сколько должно быть антител после вакцинации, чтобы гарантировать надежный уровень защиты. Плюс уровень антител ничего не говорит о состоянии клеточного иммунитета, а он тоже может быть очень важен для защиты.

Если вы наблюдаете за динамикой концентрации антител после вакцинации и видите ее снижение, это еще не говорит о снижении уровня защиты. Как мы выяснили выше, падение концентрации антител в крови с течением времени — это нормальное явление, а долговременную защиту обеспечивает иммунологическая память, которая с концентрацией антител не связана.

Не все антитела одинаково полезны

Для характеристики антител важно понимать их класс, тип и с каким антигеном они связываются.

Антитела бывают разных классов (A, M, G, E и др.). Основной класс защитных антител — G, в лабораторных исследованиях и тестах их обычно обозначают IgG. Наличие этих антител в крови говорит о наличие иммунитета после вакцинации или перенесенного заболевания. IgM — тоже защитные антитела, которые начинают вырабатываться первыми, раньше, чем IgG. Обычно IgM менее эффективны, чем IgG, и почти полностью исчезают к концу заболевания. Наличие этих антител обычно указывает на еще протекающее, или совсем недавно перенесенное заболевание, или на хроническую инфекцию. То есть, если нас интересует устойчивый иммунитет, в тестах ищем IgG.

Если антитело связывается с каким-то белком на поверхности вируса или бактерии, это далеко не всегда означает, что бактерия и вирус становятся после этого полностью безвредными. Например, вирус может использовать другой участок поверхностного белка для проникновения в клетку, не тот, с которым связалось антитело. Антитела, которые связываются с патогенами, но не подавляют их опасность, называют связывающими. Если же связывание антитела полностью «обезвреживает» микроб, «нейтрализует» его опасное влияние, такое антитело называют нейтрализующим. Связывающие антитела нельзя назвать полностью бесполезными — прикрепляясь к вирусу или бактерии, такие антитела делают их более заметными для клеток иммунной системы и ускоряют реакцию иммунитета. Но именно нейтрализующие антитела, которые могут самостоятельно обезвреживать опасные микробы, обеспечивают основную защиту, и именно их уровень важен при оценке вакцинного или естественного иммунитета. То есть в анализах нам нужно искать нейтрализующие IgG.

И, наконец, антиген. Как мы разбирали выше, антитела обладают очень высокой специфичностью и связываются только с определенными белками. Когда иммунная система, столкнувшись с инфекцией, подбирает нужное антитело, она чаще всего начинает синтезировать сразу несколько разных видов, нацеленных на разные белки возбудителя. Ведь клетки, синтезирующие антитела, получают для анализа разные кусочки полупереваренного микроба — и поверхностные, и внутренние белки — и для каждого из них ищут антитело. Для эффективной защиты важны именно те антитела, которые связываются с белками на поверхности вируса или бактерии. Ведь антитела — это крупные молекулы, которые не могут поникать внутрь вирусных частиц или бактерий, для них доступны только поверхностные белки. Именно поэтому защитный иммунитет в первую очередь обеспечивают антитела к поверхностным антигенам. Например, в случае коронавирусной инфекции вырабатывается как минимум 2 вида антител — к S-белку (который на поверхности вирусной частицы) и к N-белку (он же нуклеокапсидный белок, который находится внутри вирусной частицы). Так как до N-белка антитела добраться не могут, защиту будут обеспечивать именно антитела к S-белку. То есть, если вы все же хотите определить уровень защитных антител после прививки от ковида, нужно искать тест на нейтрализующие IgG к S-белку.

Источник

ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ ПОДГРУПП А1 И А2 АНТИГЕНА А СИСТЕМЫ АВ0: БИОЛОГИЧЕСКАЯ ОСНОВА И СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ СТРАТЕГИЯ

Полный текст:

Аннотация

Цель: создать стратегию определения вариантов антигена А с применением доступных реагентов в реакции агглютинации.

Заключение. Надежная диагностика подгруппы А₂ серологическими методами возможна с использованием лектина или моноклональных антител анти-А₁ в сочетании с анти-H моноклональным реагентом.

Конфликт интересов: авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Финансирование: исследование не имело спонсорской поддержки.

Ключевые слова

Для цитирования:

Головкина Л.Л., Каландаров Р.С., Стремоухова А.Г., Калмыкова О.С., Пушкина Т.Д., Сурин В.Л., Пшеничникова О.С., Николаева Т.Л., Оловникова Н.И. ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ ПОДГРУПП А1 И А2 АНТИГЕНА А СИСТЕМЫ АВ0: БИОЛОГИЧЕСКАЯ ОСНОВА И СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ СТРАТЕГИЯ. Гематология и трансфузиология. 2019;64(4):504–515. https://doi.org/10.35754/0234-5730-2019-64-4-504-515

For citation:

Golovkina L.L., Kalandarov R.S., Stremoukhova A.G., Kalmykova O.S., Pushkina T.D., Surin V.L., Pshenichnikova O.S., Nikolaeva T.L., Olovnikova N.I. DIFFERENTIATION OF THE A1 AND A2 SUBGROUPS OF THE AB0 SYSTEM: BIOLOGICAL BACKGROUND AND SEROLOGICAL STRATEGY. Russian journal of hematology and transfusiology. 2019;64(4):504–515. (In Russ.) https://doi.org/10.35754/0234-5730-2019-64-4-504-515

Введение

Целью настоящей работы было создать стратегию определения вариантов антигена А с применением доступных реагентов в реакции агглютинации.

Материалы и методы

В исследовании использовали образцы крови доноров, полученные в отделении заготовки крови ФГБУ «НМИЦ гематологии» МЗ РФ после получения информированного согласия; все тесты проводили после завершения иммуносерологического тестирования и исследования на патогены. Материалом исследований были образцы крови 23 человек со слабым вариантом антигена А, из которых у 16 человек была группа крови А₂, у 5 — группа A₂B, у 2 — серологически была определена группа A₃, а также 12 образцов крови с антигеном А в качестве контроля (из них у 6 человек была группа крови А и у 6 — группа AB).

Применяли следующие методы.

Перекрестное определение группы крови системы АВ0 в реакции агглютинации на плоскости с использованием Эритротест Цоликлонов анти-А (сер. 423R и 433F) и анти-В (сер 424R) (ООО «Гематолог», Москва) и стандартных эритроцитов групп А1, В, 0 (BioRad, США). Активными компонентами Цоликлонов являются моноклональные антитела класса IgM мыши: клоны А-90/16 и Birma (Цоликлон анти-А вариант R), клоны А-90/16, А-86/3 и 9113D10 (Цоликлон анти-А вариант F), клон В-85/2-В8 (Цоликлон анти-В вариант R).

Определение подгруппы антигена А в реакции агглютинации на плоскости с использованием моноклонального реагента Цоликлона анти-А₁ (сер. 261) (клоны 1Е3 и 5Е6), Эритротест анти-А_: лектина (сер. 259), Цоликлона анти-Нкра (сер. 735) (клон Н-89/8) (ООО «Гематолог», Москва); анти-А1 лектина (сер. 020317В), анти-Н (А2) (сер. 080517С) (клон 10934C11) (ImuMed Antitoxin, Германия); анти-А₁-лектина (сер. 118100201) (Bio-Rad, США). Силу реакции оценивали по 4-крестовой системе через 5 мин после смешивания эритроцитов с реагентом в соответствии с таблицей 1.

Таблица 1. Оценка силы реакции гемагглютинации

Table 1. Strength of haemagglutination reaction

Источник

Антиген а2 имеет гораздо более высокую агглютинабельность чем антиген а1

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

Молекулярно-серологические характеристики типов слабого антигена D системы резус

Журнал: Терапевтический архив. 2016;88(7): 78-83

Головкина Л. Л., Стремоухова А. Г., Пушкина Т. Д., Каландаров Р. С., Атрощенко Г. В., Васильева М. Н., Сурин В. Л., Саломашкина В. В., Пшеничникова О. С., Митерев Г. Ю., Паровичникова Е. Н., Савченко В. Г. Молекулярно-серологические характеристики типов слабого антигена D системы резус. Терапевтический архив. 2016;88(7):78-83.
Golovkina L L, Stremoukhova A G, Pushkina T D, Kalandarov R S, Atroshchenko G V, Vasilyeva M N, Surin V L, Salomashkina V V, Pshenichnikova O S, Miterev G Yu, Parovichnikova E N, Savchenko V G. Molecular serological characteristics of weak D antigen types of the Rhesus system. Terapevticheskii Arkhiv. 2016;88(7):78-83.
https://doi.org/10.17116/terarkh201688778-83

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

Резюме Цель исследования. Оценка распространенности типов слабого антигена D (weak D) системы резус у россиян и возможности выявления этих типов серологическими методами. Материалы и методы. Исследовали эритроциты и ДНК людей с ослабленной экспрессией антигена D с помощью реакции агглютинации эритроцитов в солевой среде (2 метода); реакции агглютинации в гелевых колонках с IgM+IgG анти-D-антителами, непрямого антиглобулинового теста с IgG анти-D-антителами (2 метода); полимеразной цепной реакции для установления типа weak D. Результаты. В 2014—2015 гг. резус-фенотип определен у 5100 человек. Ослабление агглютинабельных свойств эритроцитов выявлено у 102 (2%) обследованных. Генотипирование для идентификации вариантов антигена weak D проведено у 63 обследованных, выявлено 6 типов weak D. Наиболее частыми оказались типы weak D type 3 (n=31; или 49,2%) и weak D type 1 (n=18; или 28,6%), в том числе в одном случае weak D type 1.1 (1,6%). Остальные 4 типа антигена weak D имели следующие частоты: weak D type 2 — 14,3% (n=9), weak D type 15 — 4,8% (n=3), weak D type 4.2 (DAR) (n=1) и weak D type 6 (n=1) — по 1,6% каждый. Наиболее чувствительным серологическим методом идентификации антигена weak D был антиглобулиновый тест в гелевых колонках, содержащих антиглобулиновую сыворотку. В 2 образцах эритроцитов с фенотипами Ccdee и ccdEe наличие weak D type 15 установлено только молекулярным методом. Заключение. Серологическими методами слабый антиген D выявлен в 96,8% случаев. Особое внимание при проверке на наличие weak D следует уделять людям с D-отрицательным фенотипом, имеющим антигены С или Е. Наши исследования, проведенные впервые в России, позволят улучшить иммунологическое обеспечение безопасности трансфузий пациентам сред, содержащих эритроциты.

ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва, Россия

ПЦР — полимеразная цепная реакция

ССЭ — среды, содержащие эритроциты

OD — оптическая единица

Среди выявленных в настоящее время 35 антигенных систем эритроцитов самой полиморфной является система резус. Она включает 59 антигенов. Биосинтез антигенов системы резус кодируется двумя генами — RHD и RHCE, расположенными на коротком плече 1-й хромосомы (1p36.11) [1]. Эти два гена имеют высокую степень гомологии — 93,8%, касающуюся всех интронов и кодирующих экзонов [2]. Гены расположены близко друг к другу, но в обратной ориентации: <RHCE(5′->3′)-(3′ Таблица 1. Распространенность типов антигена weak D и фенотипов антигенов системы резус у weak D-положительных лиц Всего, % 100 74,5 4,8 3,2 14,3 1,6 1,6

Сведения о силе и времени появления агглютинации с эритроцитами разных типов weak D суммированы в табл. 2, чувствительность серологических методов при определении типов weak D — в табл. 3.

Таблица 2. Серологическая характеристика эритроцитов с разными типами weak D Примечание. отр — реакция отрицательная, агглютинация отсутствовала.

Таблица 3. Чувствительность серологических методов выявления разных типов weak D

Агглютинация эритроцитов weak D type 1 с цоликлоном анти-D-супер класса IgM на плоскости (метод № 1) идентифицирована в 55,6% случаев (см. табл. 2, 3), формировалась, как правило, к 3-й минуте и была мелкой. В реакции солевой агглютинации (метод № 2) положительный результат получен уже в 83,3% случаев, разведение анти-D IgM антител колебалось от 1:2 до 1:32. Таким образом, дополнительная инкубация тестируемых эритроцитов с полными анти-D-антителами в течение 1 ч способствовала лучшему склеиванию эритроцитов. В методе № 3 положительный результат на 1+ и 3+ получен в 66,7% случаев. Применение непрямого антиглобулинового метода в классической постановке (метод № 4) повышало выявляемость weak D type 1 до 94,1%, а в гелевых картах (метод № 5) — до 100%.

Мелкая агглютинация эритроцитов weak D type 2 с анти-D Цоликлоном класса IgM (метод № 1) формировалась к 5-й минуте наблюдения только у 1 из 9 обследованных лиц, частота выявления составила 11,1% (см. табл. 2, 3). В реакции солевой агглютинации (метод № 2) положительный результат получен в 77,8% случаев, разведение анти-D IgM антител колебалось от 1:8 до 1:32. В гелевых картах (метод № 3) реакцию на 1+ —2+ наблюдали у 4 (44,4%) из 9 человек. Методы, основанные на непрямом антиглобулиновом тесте, были более чувствительными. Непрямая проба Кумбса в классической постановке (метод № 4) позволяла идентифицировать антиген weak D type 2 в 88,9% случаев, а в гелевых картах LISS/COOMBS (метод № 5) — в 100% случаев.

Генотипирование позволило выявить weak D type 3 у 31 человека, из которых у 30 (96,8%) наблюдали формирование на плоскости мелкой агглютинации в основном ко 2—3-й минуте (метод № 1). В реакции солевой агглютинации разведение анти-D моноклонального реагента колебалось от 1:16 до 1:1024, в гелевых картах сила реакции составляла от 3+ до 4+. Отдельно дадим характеристику одного образца эритроцитов: моноклональные анти-D-антитела IgM класса не агглютинировали эритроциты на плоскости, разведение антител в методе 2 составило 1:2, в гелевых картах сила реакции была на 1+. Методы с применением неполных анти-D-антител (методы № 4 и № 5) позволяли выявить антиген weak D в 100% случаев, сила реакции в геле составляла от 3+ до 4+ (см. табл. 2, 3).

Серологические методы успешно выявляли экспрессию weak D type 4.2 (DAR) и weak D type 6 (см. табл. 2). Экспрессию weak D type 15 удалось выявить на эритроцитах только одного образца и только с помощью непрямого антиглобулинового теста в классическом исполнении (метод № 4) и гелевых колонках (метод № 5) (см. табл. 2), а с эритроцитами еще двух образцов все серологические методы показали отрицательный результат. Поскольку фенотип эритроцитов у этих людей определен как Ccdee и ccdEe, решено выполнить генетическое исследование, при котором и установлено наличие weak D type 15.

Таким образом, самыми эффективными серологическими методами выявления антигенов weak D являются те, что основаны на непрямом антиглобулиновом тесте, выполняемом в гелевых колонках. Однако и эти методики не позволяют идентифицировать некоторые типы слабого D, например некоторые варианты weak D type 15. Мы описали новый методический подход к выявлению таких типов weak D, основанный на применении отдельных неполных моноклональных антител, а не их смеси [22].

Обсуждение

Современные молекулярные методы исследования позволяют идентифицировать редкие аллели генов RHD, продукты которых выявляются серологическими методами как слабый антиген D — weak D. При очень слабой выраженности антигена weak D вследствие крайне малого количества антигенных детерминант на эритроците серологические методы для его выявления неэффективны. В проведенных нами исследованиях в большинстве случаев weak D выявляли всеми 5 серологическими методами. При этом во всех случаях отмечали появление более мелкой агглютинации и увеличение времени реакции (до 1—3 мин вместо 0—5 с) по сравнению с контролем, а в реакции агглютинации в солевой среде — снижение титра реакции на 4—10 ступеней по сравнению с положительным контролем. В целом наиболее эффективным методом выявления weak D остается непрямая проба Кумбса, особенно при использовании гелевых колонок с антиглобулиновой сывороткой. Так, только в этом тесте выявлены weak D type 15 (1 случай), weak D type 1 (1 случай), weak D type 2 (1 случай). В проведенных исследованиях скорость реакции в непрямой пробе Кумбса с эритроцитами weak D type 3 (в большинстве случаев 1 мин) оказалась выше, чем с эритроцитами weak D type 1 и weak D type 2 (чаще всего 2 мин), что можно объяснить разным количеством антигенных детерминант на эритроцитах. В 2 случаях антиген weak D type 15 серологически не выявлялся ни одним методом, и этот тип антигена D идентифицирован только молекулярным методом. Таким образом, в настоящее время в иммуногематологической практике нет серологического метода и реактивов, которые обеспечивали бы определение всех без исключения типов weak D. Только молекулярно-генетическое исследование гарантирует выявление всех этих вариантов. Наша работа является продолжением исследований, начатых еще в прошлом столетии Т.М. Пискуновой. Именно она в 70-х годах XX века первой провела работу по изучению серологических свойств эритроцитов с weak D [23, 24] и отметила их разную агглютинабельность.

Трансфузиологическая стратегия. Определение типов антигена weak D зависит от чувствительности типирующих реактивов и применяемых методик. В большинстве стран реципиентов относят к D+ и переливают D±эритроциты, если эритроциты потенциальных реципиентов агглютинируются двумя сериями анти-D-реактивов класса IgM. Но такие реактивы не агглютинируют эритроциты с парциальным антигеном DVI. Больным с антигеном DVI переливают эритроциты от D-отрицательных доноров для устранения риска анти-D-аллоиммунизации.

F. Wagner и соавт. [16] предложили свой алгоритм выявления типов антигена weak D и соответствующую трансфузионную тактику для реципиентов. По их мнению, следует принимать во внимание распространенность типов weak D в популяции и качественные изменения их антигенных структур, т. е. оценивать риск анти-D-аллоиммунизации. D±эритроциты следует переливать больным со слабым D, имеющим на своих эритроцитах схожую или более высокую плотность антигенов, чем у людей с weak D type 2. Таким образом, пороговое значение плотности антигенных детерминант D составит около 400 на 1 эритроцит. Этот показатель является и пороговым значением чувствительности для анти-D-антител класса IgM, применяемых в реакции солевой агглютинации в пробирках или в гелевых картах. Авторы предлагают использовать эритроциты с weak D type 2 для контроля качества реактивов анти-D, применяемых для фенотипирования, что реализовано на практике специалистами из США. У представителей европеоидной расы чаще выявляют слабый антиген D тип 1, тип 2 и тип 3 — в 97% случаев [12]. Плотность антигена D при этих вариантах превышает пороговое значение 400 антигенов на один эритроцит. Поэтому таким реципиентам в 97% случаев для переливания будут ССЭ от резус-положительных доноров [20]. Если для идентификации антигена D необходима постановка непрямого антиглобулинового теста, значит его плотность на клетке ниже пороговой, и таким пациентам следует переливать эритроциты от D-отрицательных доноров. Число таких больных составит около 3%.

Стратегия по отношению к донорам компонентов крови иная: все потенциально иммуногенные D+ образцы эритроцитов следует относить к резус-положительным. Для выявления слабых вариантов антигена D у доноров следует применять высокочувствительные методики, основанные на непрямом антиглобулиновом тесте, и реактивы на основе IgG-антител [25].

Суммируя перечисленное, трансфузионную стратегию можно сформулировать следующим образом: если слабый антиген D можно идентифицировать с помощью реактивов с анти-D-антителами класса IgM любым методом без применения непрямого антиглобулинового теста, то больному можно переливать эритроциты от резус-положительного донора. Однако в практической работе российских иммуногематологов такой подход зарубежных коллег представляется не совсем оправданным, так как одними серологическими методами нельзя установить причину ослабления экспрессии антигена D. Эритроциты с парциальными антигенами D также могут иметь пониженную агглютинационную активность с анти-D-антителами класса IgM, а больные с такими вариантами антигена D будут подвержены риску анти-D-аллоиммунизации при переливании резус-положительных эритроцитов [26]. Только результаты молекулярных методов исследования (генотипирование) позволяют однозначно выявить причину ослабления экспрессии антигена D. Тип слабого антигена D важно идентифицировать еще и потому, что люди с weak D type 7 и weak D type 4.2 подвержены риску анти-D-аллоиммунизации, несмотря на большую плотность антигенных детерминант на эритроцитах, и им необходимы для переливания эритроциты от D-отрицательных доноров. Применение генотипирования особенно важно в тех популяциях, в которых распространенность подобных типов слабого антигена D высока. В России нами впервые проводится работа по выявлению частоты типов слабого антигена D в российской популяции.

Источник

Онлайн портал chistoug.ru

Антиген а2 имеет гораздо более высокую агглютинабельность чем антиген а1

Антиген а2 имеет гораздо более высокую агглютинабельность чем антиген а1

Иммунные реакции. Классификация имунных реакций